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贴壁细胞-培养经验分享!

贴壁细胞

收货后培养经验分享:

. 收货贴壁细胞后取出细胞培养瓶,撕掉封口膜并消毒放入37°或特定温度培养箱静置。等全部稳定贴壁后拍照100X和200X反馈给我们以便确认状态和后期售后需要。

二.弃去运输培养基(通常为防止细胞运输过程中增殖而爆满,运输培养基我们会降低营养成份包括血清浓度和添加剂),用PBS润洗细胞1-2次并吸走。特殊细胞完全培养基充液发货则收集配套培养基备用。

. T25瓶加入0.25EDTA胰蛋白酶1-2ml于培养瓶中震荡混匀,如果属于贴壁不牢固的细胞很容易脱落的就在培养箱外消化震荡等脱落90%以上终止消化,一般小于1分钟以内,甚至不加胰酶有部分贴壁非常不牢固的细胞也会自然震荡脱落。如果是贴壁牢固的细胞则置于37℃培养箱中消化提高效率,每40-50秒拿出培养箱震荡帮助细胞脱落,如果脱落90%以上则对应3-6ml含有10%血清的完全培养基终止彻底,以防胰酶残留。如果贴壁非常牢固的细胞,脱落的比例比较低,也不超过2分钟后终止消化彻底,再加入1ml完全培养基让细胞缓冲后再过2分钟进行二次消化,反复分步消化以降低单次消化时长,减少刺激,保护细胞膜。或采用刮产刮细胞的方式处理也可以。总归原则是达到消化目的的同时减少细胞膜受到的损伤越小越好。

.消化完成后轻轻吹匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按12的比例分到新T25或6cm培养皿中(特殊情况密度比较低的话可以选择1:1的方式),添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2或者以上的比例进行。期间多的细胞一定保存多份细胞冻存管备种以防断种。


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